La grande majorité des 1400 espèces de chauves-souris existant à travers le monde vivent la nuit. En tant que prédatrices des insectes volants nocturnes, elles sont ainsi moins concurrencées par les oiseaux diurnes lors de la chasse. Grâce à l'écholocation, elles sont capables de se déplacer dans le noir, en se servant de l'écho des ultrasons qu'elles émettent pour identifier leurs proies.
Si la chauve-souris dort à l'envers, c'est pour échapper à ses prédateurs - rapaces et petits carnassiers - en s'envolant rapidement et sans élan. Elle passe une grande partie de sa vie suspendue par les pieds, hivernant dans des endroits abrités et peu fréquentés, comme les cavités naturelles, les troncs d’arbres ou les caves des habitations. Son organisme fonctionne alors au ralenti. Elle ne respire plus que toutes les trois minutes, son rythme cardiaque passant de 400 à 10 battements par minute et sa température corporelle baissant de 38°C à 10°C.
Les chiroptères d'Europe sont essentiellement insectivores et consomment moustiques, papillons de nuit et coléoptères. En une nuit, une seule chauve-souris mange l’équivalent de son poids en insectes, soit entre 500 et 600 par heure ! En Amérique latine, trois espèces se nourrissent de sang. Mesurant à peine une dizaine de centimètres, le vampire commun, le vampire à pattes velues et le vampire à ailes blanches possèdent des dents acérées qui leur permettent de blesser leur proie et d'en lécher la plaie.